IMS-PCR检测食品中的单增李斯特菌

【摘要】单增李斯特菌是自然界中一种常见的致病菌，能感染人类和动物；李斯特菌病是具有高致死率的一种疾病。因此，采用科学的方法检测食品中是否含有单增李斯特菌就显得非常重要。本文利用IMS-PCR法能快速、简便地从食品中检测出单增李斯特菌。免疫磁珠法(ImmunomagneticSeparation简称IMS法或Listertest法)是利用抗原抗体反应的原理，做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验；PCR(PolymeraseChainReaction)法是针对单增李斯特菌的iap基因（编码p60蛋白）设计特异性引物，进行PCR扩增反应；做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验。通过对这两种方法的分析和比较，建立IMS-PCR法，利用PCR法的引物，做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验。同时，国标法（检测的标准方法）和实时荧光定量PCR法（试剂盒）作为IMS-PCR法的对照,同IMS-PCR法实验结果进行分析和比较。IMS法：能快速捕集细菌，在培养液中进行增菌（37℃14～18h）；通过溶血反应和鼠李糖反应确认是否为单增李斯特菌，需要3～7天，敏感性能达到10-7。PCR法：从食品中获取单增李斯特菌到进行增菌培养要3～5天，提取细菌基因组DNA，并对其进行了PCR扩增，结果得到片段的长度为230bp，需要4h就得出结果，敏感性能达到10-5。IMS-PCR法：从快速捕集细菌到进行增菌培养，再经PCR扩增后得到片段长度为230bp；只需在1天内就能检测出单增李斯特菌，缩短了检测的时间；同时提高单增李斯特菌检测的特异性和敏感性。IMS-PCR法的实验结果与国标法和实时荧光定量PCR法（试剂盒）法的结果相符，然而它比国标法简便、快速、灵敏度高，比实时定量PCR（试剂盒）法价格低；因此从经济和实用性上，IMS-PCR法有很好的应用前景和研究价值。
【作者】杭华；
【导师】钱斯日古楞；吴斌；
【作者基本信息】大连工业大学，发酵工程，2008，硕士
【关键词】单核细胞增生李斯特菌；国标法；免疫磁分离；PCR；模板；实时荧光定量；IMS-PCR；

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